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　　BUNSEN本生：細(xì)胞凍存管應(yīng)如何解凍?

　　BUNSEN本生針對(duì)細(xì)胞凍存管的解凍操作，遵循?“慢凍快融"?原則，全程兼顧細(xì)胞活性保護(hù)與操作安全，具體規(guī)范流程如下：

　　解凍前安全準(zhǔn)備

　　全程穿戴實(shí)驗(yàn)服、低溫棉手套，建議佩戴護(hù)目鏡或防護(hù)面罩，避免液氮凍傷或凍存管爆裂造成的生物危害。

　　提前預(yù)熱培養(yǎng)基至37℃，準(zhǔn)備好70%酒精、無(wú)菌離心管、移液器等無(wú)菌耗材，在超凈工作臺(tái)內(nèi)提前完成消殺準(zhǔn)備。

　　從液氮罐取出凍存管后，先在空氣中靜置3~5秒，讓管內(nèi)可能滲入的微量液氮充分揮發(fā)，避免直接入水后液氮?dú)饣l(fā)爆管。

　　快速解凍操作

　　將凍存管迅速放入?37℃恒溫水浴?中，持續(xù)輕柔搖動(dòng)，確保1~2分鐘內(nèi)融化，僅留極少量冰晶時(shí)即可取出，絕對(duì)避免緩慢解凍導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)二次形成冰晶損傷活性。

　　嚴(yán)格控制水浴液面高度，確保水面不超過(guò)凍存管蓋沿，防止水滲入管內(nèi)造成細(xì)胞樣本污染。

　　無(wú)菌轉(zhuǎn)移與細(xì)胞復(fù)蘇

　　解凍完成后，立即用70%酒精擦拭凍存管外壁，移入超凈工作臺(tái)內(nèi)完成后續(xù)操作。

　　輕柔擰開(kāi)管蓋，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至預(yù)先裝有少量預(yù)熱培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中：

　　若凍存液中DMSO濃度為5%，無(wú)需離心，直接用15ml培養(yǎng)液稀釋后即可接種，該濃度下DMSO無(wú)明顯細(xì)胞毒性;

　　針對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞系，采用低速離心法：125~500g離心5~10分鐘，棄去含凍存保護(hù)劑的上清液，用1~2ml新鮮預(yù)熱培養(yǎng)基輕柔重懸細(xì)胞沉淀。

　　復(fù)蘇后培養(yǎng)與后續(xù)觀察

　　將重懸后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至提前準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中，混合均勻后放入37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，接種后12小時(shí)內(nèi)盡量避免移動(dòng)培養(yǎng)容器，減少對(duì)細(xì)胞貼壁的干擾。

　　關(guān)鍵避坑提醒

　　凍存管日常儲(chǔ)存必須放置在液氮?dú)庀鄬踊?80℃冰箱中，禁止直接浸入液氮液相，從根源上避免液氮滲入管內(nèi)引發(fā)復(fù)蘇時(shí)爆管的風(fēng)險(xiǎn)。

　　凍存樣本量不得超過(guò)凍存管的額定工作體積，防止冷凍過(guò)程中管內(nèi)形成冰塞，產(chǎn)生高壓損壞管體引發(fā)安全隱患。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

　　本生BUNSEN一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。